Efficiency Wax -ku -oolnimada sare -u -qaadidda: Jajabka DNA ee cabbirro kala duwan (ka hooseeya 5 kb) iyo ilaha ayaa si karti leh loo xoojin karaa.
Sens Dareen aad u sarreeya: Ilaa 10 pg oo jajabyo bartilmaameed ah ayaa laga xoojin karaa shaybaarada hidde -wadaha.
Resistance Cadaadiska cadaadiska oo sarreeya: Mabaadi'da leh waxyaabo nijaas ah oo aad u sarreeya sida template-ka-soo-baxa/dhaqanka bakteeriyada, jajabka bartilmaameedka ayaa si fudud loo kordhin karaa. Waxqabadka polymerase ma saamayn doono baraf soo noqnoqda iyo dhalaalid.
Ku habboon codsiyada: Nidaamka falcelinta waxaa loo diyaariyey si fudud oo degdeg ah. Jajabka la weyneeyay wuxuu ka kooban yahay 3 ′ end dA-overhang, kaas oo ku habboon xirmidda TA.
Nooca: Taq DNA polymerase
Muunad: Template la nadiifiyey/si adag loo soo saaray/dhaqanka bakteeriyada
Qaab: > 10 bog
Cabbirka jajabka: <5 kb
Codsiyada: Baadhitaanka PCR ee jajabka DNA, calaamadaynta DNA, fidinta asaasiga ah, go’aaminta isku xigxiga, ogaanshaha hidda-wadaha baaxadda leh, tijaabooyinka PCR oo tiro-koob ah, ogaanshaha raad-raac DNA, iwm.
Dhammaan alaabooyinka waxaa loo habeyn karaa ODM/OEM. Faahfaahinta,fadlan guji Adeegga La -habeeyey (ODM/OEM)
![]() |
Jaantuska 1. Istaraatiijiyadaha ilaha kala duwan waxaa sii xoojiyay TIANGEN Taq MasterMix II iyo Taq Mix -ka caadiga ah ee Bixiyaha TR siday u kala horreeyaan si loo ogaado iska -caabbinta walbahaarka ee reagents -ka. Natiijooyinku waxay muujinayaan in alaabada TIANGEN ay kor u qaadi karto jajabyada bartilmaameedka ah ee ka imanaya shaybaarrada hidde -sidaha iyo dhaqanka bakteeriyada, iyo iska -caabbinta walaaca ayaa ka fiican tan Soo -saaraha TR. J. Prp/DN: Soo -saaridda cayriin iyo ogaanshaha muunadaha dhiigga aadanaha. Bariis: Soo -saarid cayriin iyo ogaanshaha shaybaarka bariiska. B: Gumaysiga PCR. Jajabka PCR waa 700 bp. M: TIANGEN Sumadeeye III |
![]() |
Caalami ahaansho wanaagsan oo loogu talagalay sheybaarada laga helo ilo kala duwan iyo dherer kala duwan Jaantuska 2. Jajabyada ilaha kala duwan iyo dhererka ayaa la xoojiyay iyadoo la adeegsanayo TIANGEN Taq MasterMix II (A) iyo caadi Taq Isku -darka Alaab -qeybiye TK (B), Alaab -qeybiye TR (C), Alaab -qeybiye V (D) iyo Alaab -qeybiye G (E) siday u kala horreeyaan. Natiijooyinku waxay muujinayaan in wax -qabadka dhammaystiran ee alaabooyinka TIANGEN uu yahay kan ugu wanaagsan marka la eego awoodda wax -weyneynta, gaar ahaanshaha iyo guud -ahaanshaha.M: TIANGEN Calaamadee III1: Soybean genomic DNA template (120 bp); 2-3: Nooca DNA-ga ee hidde-wadaha bariiska (694 bp, 2258 bp); 4: Habka hidde -wadaha DNA ee suufka (200 bp); 5: Coli Escherichia qaab -dhismeedka DNA ee hidde -wadaha (2298 bp); 6-7: Mouse genome DNA template (1 kb, 2 kb); 8-10: Qaab-dhismeedka DNA ee jiirka (1 kb, 2 kb, 2080 bp); 11-18: Qaab-dhismeedka DNA ee hidde-wadaha aadanaha (300 bp, 448 bp (GC%: 74.8%), 1100 bp, 750 bp, 1000 bp, 1090 bp (GC%: 70.4%), 2 kb, 4 kb) |
![]() |
Dareen sare Jaantuska 3. Ururada kala duwan ee jiirka iyo jajabka DNA -ga aadanaha ayaa la xoojiyay iyadoo la adeegsanayo TIANGEN Taq MasterMix II (A), caadi ah Taq Isku -darka Alaab -qeybiye V (B) iyo Alaab -qeybiye TK (C), siday u kala horreeyaan, si loo ogaado xasaasiyadda xoojinta. Natiijooyinku waxay muujinayaan in badeecada TIANGEN ay kor u qaadi karto jajabka bartilmaameedka ee shaybaarka hidde sida ugu hooseeya 0.01 ng, iyo xasaasiyaddiisu way ka fiican tahay tan alaabooyinka ka yimid Alaab-qeybiye V iyo TK.M: TIANGEN Marker III, N: NTCTemplate input 1-8 : 200 ng, 100 ng, 50 ng, 20 ng, 10 ng, 1 ng, 0.1 ng, 0.01 ng. |
A-1 Template
Template Qaab -dhismeedka waxaa ku jira wasakhda borotiinka ama ka -hortagayaasha Taq, iwm .——- Daahiri template DNA, ka saar wasakhda borotiinka ama soo saar DNA -da template oo leh xirmooyin nadiifin ah.
Diidmada qaab -dhismeedku ma dhammaystirna ——-In si habboon loo kordhiyo heerkulka denaturation -ka oo la dheereeyo waqtiga wax -soo -saaridda.
Deg Hoosudhaca Template ——Dib u diyaari template-ka.
A-2 Primer
Quality Tayada liidata ee raasamayaasha ——Dib-isugu-dar-darreeyaha.
Rad Hoos -u -dhac horudhac ah ——Waxaad u dhigtaa aasaaska fiirsashada sare mugga yar si loo ilaaliyo. Ka fogow baraf badan iyo dhalaalid ama 4 ° C cryopreserved.
Design Naqshadeynta aan fiicnayn ee raasamaalka (tusaale.
A-3 Mg2+foojignaan
■ Mg2+ feejignaanta ayaa aad u yar ——Si fiican u kordhi Mg2+ feejignaanta: Hagaajinta Mg2+ ku -uruurinta falcelinno taxane ah oo ka bilaabma 1 mM illaa 3 mM oo u dhexeysa 0.5 mM si loo go'aamiyo Mg -ga ugu habboon2+ xoojinta template kasta iyo hordhac.
A-4 Heer kululaynta
Temperature Heerkulka ku -shubista oo sarreeya wuxuu saameeyaa ku -xidhmidda aasaaska iyo tusaalaha. ——Soo yaree heerkulka sifeynta oo aad ku wanaajiso xaaladda iyadoo leh weji 2 ° C ah.
A-5 Waqtiga Kordhinta
Time Wakhti kordhinta oo gaaban —— Kordhi wakhtiga kordhinta.
Phenomena: Shaybaarada taban ayaa sidoo kale muujinaya kooxaha taxanaha bartilmaameedka ah.
A-1 Faddaraynta PCR
Ka gudubta isku xigxiga bartilmaameedka ama alaab -weyneynta ——- Si taxaddar leh ha ugu shubin saambalka ay ku jiraan isku xigxiga bartilmaameedka muunadda taban ama ka daadi tuubada centrifuge -ga. Soo -saareyaasha ama qalabka waa in si otomaatig ah loo xiro si loo baabi'iyo asiidhka nucleic ee jira, iyo jiritaanka faddaraynta waa in lagu go'aamiyaa tijaabooyinka xakamaynta xun.
Contamin Faddaraynta reagent ——Soo celi reagentyada oo ku kaydi heerkul hoose.
A-2 Ra'iisulr
■ Mg2+ feejignaanta ayaa aad u yar ——Si fiican u kordhi Mg2+ feejignaanta: Hagaajinta Mg2+ ku -uruurinta falcelinno taxane ah oo ka bilaabma 1 mM illaa 3 mM oo u dhexeysa 0.5 mM si loo go'aamiyo Mg -ga ugu habboon2+ xoojinta template kasta iyo hordhac.
Design Naqshadaynta asaasiga ah ee aan habboonayn, iyo taxanaha bartilmaameedka ayaa leh isbarbardhig leh isku xigxiga aan bartilmaameedka ahayn. —— Dib-u-naqshadeeyayaasha naqshadeynta.
Phenomena: Kooxaha kor u qaadista PCR-ku ma waafaqsana cabbirka la filayo, ha weynaado ama ha yaraado, ama mararka qaarkood labada qaybood ee xoojinta gaarka ah iyo guutooyinka xoojinta aan gaarka ahayn ayaa dhaca.
A-1 Horudhac
Specific Tilmaamid asaasi ah oo liidata
—— Dib-u-naqshadeynta asaasiga ah.
Concentration Feejignaanta asaasiga ahi aad bay u sarraysaa ——Si fiican u kordhi heerkulka denaturation -ka oo sii dheeree waqtiga dheellitirka.
A-2 Mg2+ foojignaan
M Mg2+ feejignaanta ayaa aad u sareysa ——Si fiican u yaree feejignaanta Mg2+: Hagaaji Mg2+ ku -uruurinta falcelinno taxane ah oo ka bilaabma 1 mM illaa 3 mM oo u dhexeysa 0.5 mM si loo go'aamiyo Mg -ga ugu habboon2+ xoojinta template kasta iyo hordhac.
A-3 Polymerase Thermostable
Amount Qaddarka enzme -ka xad -dhaafka ah——Soo yaree xaddiga enzyme si habboon oo u dhexeeya 0.5 U.
A-4 Heer kululaynta
Temperature Heerkulka ku-shubista ayaa aad u hooseeya ———In si habboon loo kordhiyo heerkulka daboolidda ama la qaato habka laba-wajiye
A-5 wareegyada PCR
Cy Wareegyo PCR aad u badan ——Soo yaree tirada wareegyada PCR.
A-1 Horudhac—— Tilmaamid liidata —— Dib-u-naqshadee horudhaca, beddel booska iyo dhererka astaanta si kor loogu qaado gaar ahaanshaheeda; ama samayso PCR buul ah.
A-2 Template DNA
—— Qaab -dhismeedka ma aha mid daahir ah ——Ku nadiifi template -ka ama ka soo saar DNA -da xirmooyinka is -daahirinta.
A-3 Mg2+ foojignaan
——Mg2+ feejignaanta ayaa aad u sareysa ——Si fiican u yaree Mg2+ feejignaanta: Hagaajinta Mg2+ ku -uruurinta falcelinno taxane ah oo ka bilaabma 1 mM illaa 3 mM oo u dhexeysa 0.5 mM si loo go'aamiyo Mg -ga ugu habboon2+ xoojinta template kasta iyo hordhac.
A-4 dNTP
—— Ku -uruurinta dNTP -yada aad ayay u sarraysaa ——Si habboon u yaree uruurinta dNTP
A-5 Heerkulbeeg
—— Heerkulka dabaysha oo aad u hooseeya ——- Si habboon u kordhi heerkulka dabaysha
A-6 Wareegyo
——Toolooyin badan ——Ku hagaaji lambarka wareegga
Tallaabada ugu horreysa waa inaad doorato polymerase habboon. Polymerase-ka caadiga ah ee Taq ma caddeyn karo sabab la xiriirta la'aanta waxqabadka 3'-5 ', iyo isku-dheelitir la'aantu waxay si weyn u yareyn doontaa wax-qabadka fidinta ee jajabyada. Sidaa darteed, polymerase -ka caadiga ah ee Taq si fiican uma kordhin karo jajabyada bartilmaameedka ee ka weyn 5 kb. Taq polymerase oo leh wax -ka -beddel gaar ah ama polymerase -ka kale ee aaminnimada sare leh waa in la xushaa si loo hagaajiyo hufnaanta fidinta oo loo daboolo baahiyaha ballaarinta jajabka dheer. Intaa waxaa dheer, xoojinta jajabyada dhaadheer sidoo kale waxay u baahan tahay hagaajin u dhiganta naqshadeynta asaasiga ah, waqtiga kala-soocidda, waqtiga kordhinta, pH-ka, iwm. Si looga hortago waxyeellada template, waqtiga denaturation -ka ee 94 ° C waa in lagu yareeyaa 30 seken ama ka yar wareeg kasta, iyo waqtiga heerkulka kor loogu qaadayo 94 ° C ka hor intaan la weyneyn waa inuu ka yaraadaa 1 min. Intaa waxaa dheer, dejinta heerkulka fidinta qiyaastii 68 ° C iyo naqshadeynta waqtiga kordhinta iyadoo la raacayo xaddiga 1 kb/min waxay xaqiijin kartaa xoojinta waxtarka leh ee jajabyada dhaadheer.
Heerka qaladka ee weyneynta PCR ayaa la dhimi karaa iyadoo la adeegsanayo polymerases DNA kala duwan oo leh aaminnimo sare. Waxaa ka mid ah dhammaan polymerase -ka Taq DNA ee la helay, Pfu enzyme wuxuu leeyahay heerka qaladka ugu hooseeya iyo daacadnimada ugu sareysa (eeg shaxda ku lifaaqan). Ka sokow xulashada enzyme, cilmi -baarayaashu waxay sii yareyn karaan heerka is -beddelka PCR iyagoo hagaajinaya xaaladaha falcelinta, oo ay ku jiraan hagaajinta halabuurka, xoojinta polymerase -ka heerkulka leh iyo hagaajinta lambarka wareegga PCR.
Tan iyo markii la aasaasay, warshaddeennu waxay horumarinaysay alaabada heerka koowaad ee adduunka iyadoo la raacayo mabda'a
tayo leh marka hore. Alaabooyinkayagu waxay sumcad fiican ka heleen warshadaha iyo aaminaad qiimo leh oo ka dhexaysa macaamiisha cusub iyo kuwii horeba ..