2, Taq Platinum PCR Mix
Qeexitaanka Waxqabadka
1 unug (U) Taq Platinum DNA Waxqabadka Polymerase waxaa lagu qeexaa xaddiga enzyme loo baahan yahay si loogu daro 10 nmol deoxynucleotides walxaha aashitada aan milmin ee 74 ° C 30 daqiiqo gudahood iyadoo la adeegsanayo shahwada salmon ee firfircoon sida DNA/template.
Xakamaynta Tayada
Daahirsanaanta ogaanshaha SDS-PAGE ayaa ka badan 99%; Wax dhaqdhaqaaq ah oo nuclease exogenous ah lama oga; Hiddo-hal-nuqul oo ku jira hidde-sidaha aadanaha ayaa si fiican loo kordhin karaa; Wax isbeddel ah oo firfircoon ma jiro marka lagu kaydiyo heerkulka qolka muddo hal toddobaad ah.
Halbeegyada Farsamo ee Ugu Weyn
Waxay leedahay waxqabad 5′-3 ′ exonuclease iyo 3′-5 activity waxqabad exonuclease, daacadnimaduna waxay ku xigtaa Pfu polymerase. Xawaaraha fidinta ee Taq Platinum Polymerase ayaa ka dhaqso badan Pfu polymerase iyo waxtarka xoojinta ayaa ka sarreeya. Badeecadaha PCR si toos ah ayaa loogu xiri karaa dhammaadka afxumada leh ama waxaa lagu xardhay vector TA. Haddii loo baahan yahay in la hagaajiyo hufnaanta dheelitirka, waxaa lagu talinayaa in marka hore la is daahiriyo oo lagu daro 3'-dA kor-u-kaca ka hor inta aan la gelin vector TA.
Hal-tubbo Taq Platinum MasterMix (Shahaadada Waxsoosaarka Heerka Sare ee Qaranka)
Ta Taq Platinum MasterMix wuxuu wanaajiyay gaar ahaanshaha iyo xasaasiyadda falcelinta PCR wuxuuna kordhin karaa qaab -dhismeedyada kakan oo leh GC sare, qaab -dhismeed labaad iyo wixii la mid ah. Ilaa 2 nuqul oo ka mid ah template -ka la beegsanayo ayaa la kordhin karaa, iyadoo la hubinayo natiijooyin tijaabo oo sax ah.
Formula Qaaciddada Taq Platinum MasterMix ee gaarka ah ayaa ka dhigaysa nidaamka falcelinta oo dhan mid xasilloon, hawshana ma saamayn doonto baraf-soo-dhalaalid soo noqnoqota ama kaydinta muddada dheer 4 ° C.
Solution Xalka isku dhafan ee PCR-ga ee xasilloon oo hufan oo hore loo diyaariyey ayaa qalliinka ka dhigi kara mid degdeg ah oo fudud, si weynna u yareeya xoojinta shaqada iyo khalad sambal. Kor-u-qaade PCR-ga wax-qabadka sare leh iyo hagaajiye ayaa sidoo kale lagu daray isku-darka, kaasoo yareynaya shuruudaha xaaladaha PCR.
Product Badeecadani waxay leedahay nidaamyo dheeha ku jira iyo kuwo aan dheeh lahayn labadaba. Alaabada MasterMix ee dheeha leh waxaa si toos ah loogu xiriirin karaa elektaroonigga ka dib PCR, iyada oo aan lagu darin kaydinta raridda.
Codsiyada
Waxay beddeli kartaa polymerase-ka Pfu si loo kordhiyo alaabada aaminnimada sare leh ee ka imanaya qaab-dhismeedyada adag sida hidde-sidayaasha, waxayna ku habboon tahay codsiyada sida kala-soocidda hidda-wadayaasha muujinta, is-beddellada goobta-gaarka ah iyo falanqaynta polymorphism-ka hal nucleotide (SNP), iwm.
Taxaddarrada Naqshadaynta PCR -ga:
Dhererka asaasiga ah badanaa waa 20-25 meer. Si kastaba ha noqotee, marka la sameynayo PCR jajab ah oo dheer, dhererka asaasiga ah waa in la kordhiyaa 30-35 mer.
■ Ma jiro isugeyn isugeyn ah oo u dhexeeya labada ra'iisul -wasaare, gaar ahaan saddexda saldhig ee ugu dambeeya dhammaadka 3 ′.
Content Waxa ku jira GC waa inay ahaataa 50-60%, kana fogow GC-ga hodanka ah ama AT. Si aad u samaysato hordhac iyo qaab -dhismeed si adag ugu xidhnaan, ka fogow qaab dhismeedka hodanka ah ee AT 3 ′.
Ka fogow aasaaska si aad u samaysato qaab -dhismeed labaad.
■ Dooro laba raashin oo heerkulkoodu yahay Tm oo isu dhow.
Xisaabinta Qiimaha Tm ee Primers ee PCR:
■ Marka uu hormuudku ka yar yahay 20 meer: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).
■ Marka hordhaca uu ka badan yahay 20 meer: Tm = 81.5+0.41 × (GC%)-600/L, halkaasoo L uu yahay dhererka aasaaska.
■ Calan heerkulka daboolista (Tm-5) ° C.
Soo gelinta PCR Primer
U -fiirsashada ugu dambeysa ee habboon ee ra'iisul -wasaaraha waxaa la dooran karaa inta u dhexeysa 0.1 μM iyo 1.0 μM. Feejignaanta asaasiga ah oo aad u hooseysa ayaa keenta dhalidda alaabta wax-weyneynta oo hooseysa, halka fiirsashada asaasiga ah ay aad ugu nugul tahay xoojinta aan gaarka ahayn. Caadi ahaan, marka xaddiga qaab -dhismeedka DNA -gu uu yahay mid weyn ama qaab -dhismeed adag oo DNA ah (sida hidde -sidaha hiddo -wadaha aadanaha) ayaa loo adeegsadaa qaab -dhismeed ahaan, fiirsiga asaasiga ahi waa inuu hooseeyaa. Marka caddadka shaybaarka DNA -ga uu yar yahay ama fudud yahay DNA -ga (tusaale, DNA -ga plasmid -ka, iwm.) Waxaa loo adeegsadaa qaab -dhismeed ahaan, fiirsiga asaasiga ahi waa inuu ka sarreeyaa.
Dhammaan alaabooyinka waxaa loo habeyn karaa ODM/OEM. Faahfaahinta,fadlan guji Adeegga La -habeeyey (ODM/OEM)
  |
U adeegso DNA -ga hidde -sidaha si aad u kordhiso jajab 1 kb Ka dib falcelinta PCR, qaado 5 μl si loo ogaado electrophoresis. |
A-1 Template
Template Qaab -dhismeedka waxaa ku jira wasakhda borotiinka ama ka -hortagayaasha Taq, iwm .——- Daahiri template DNA, ka saar wasakhda borotiinka ama soo saar DNA -da template oo leh xirmooyin nadiifin ah.
Diidmada qaab -dhismeedku ma dhammaystirna ——-In si habboon loo kordhiyo heerkulka denaturation -ka oo la dheereeyo waqtiga wax -soo -saaridda.
Deg Hoosudhaca Template ——Dib u diyaari template-ka.
A-2 Primer
Quality Tayada liidata ee raasamayaasha ——Dib-isugu-dar-darreeyaha.
Rad Hoos -u -dhac horudhac ah ——Waxaad u dhigtaa aasaaska fiirsashada sare mugga yar si loo ilaaliyo. Ka fogow baraf badan iyo dhalaalid ama 4 ° C cryopreserved.
Design Naqshadeynta aan fiicnayn ee raasamaalka (tusaale.
A-3 Mg2+foojignaan
■ Mg2+ feejignaanta ayaa aad u yar ——Si fiican u kordhi Mg2+ feejignaanta: Hagaajinta Mg2+ ku -uruurinta falcelinno taxane ah oo ka bilaabma 1 mM illaa 3 mM oo u dhexeysa 0.5 mM si loo go'aamiyo Mg -ga ugu habboon2+ xoojinta template kasta iyo hordhac.
A-4 Heer kululaynta
Temperature Heerkulka ku -shubista oo sarreeya wuxuu saameeyaa ku -xidhmidda aasaaska iyo tusaalaha. ——Soo yaree heerkulka sifeynta oo aad ku wanaajiso xaaladda iyadoo leh weji 2 ° C ah.
A-5 Waqtiga Kordhinta
Time Wakhti kordhinta oo gaaban —— Kordhi wakhtiga kordhinta.
Phenomena: Shaybaarada taban ayaa sidoo kale muujinaya kooxaha taxanaha bartilmaameedka ah.
A-1 Faddaraynta PCR
Ka gudubta isku xigxiga bartilmaameedka ama alaab -weyneynta ——- Si taxaddar leh ha ugu shubin saambalka ay ku jiraan isku xigxiga bartilmaameedka muunadda taban ama ka daadi tuubada centrifuge -ga. Soo -saareyaasha ama qalabka waa in si otomaatig ah loo xiro si loo baabi'iyo asiidhka nucleic ee jira, iyo jiritaanka faddaraynta waa in lagu go'aamiyaa tijaabooyinka xakamaynta xun.
Contamin Faddaraynta reagent ——Soo celi reagentyada oo ku kaydi heerkul hoose.
A-2 Ra'iisulr
■ Mg2+ feejignaanta ayaa aad u yar ——Si fiican u kordhi Mg2+ feejignaanta: Hagaajinta Mg2+ ku -uruurinta falcelinno taxane ah oo ka bilaabma 1 mM illaa 3 mM oo u dhexeysa 0.5 mM si loo go'aamiyo Mg -ga ugu habboon2+ xoojinta template kasta iyo hordhac.
Design Naqshadaynta asaasiga ah ee aan habboonayn, iyo taxanaha bartilmaameedka ayaa leh isbarbardhig leh isku xigxiga aan bartilmaameedka ahayn. —— Dib-u-naqshadeeyayaasha naqshadeynta.
Phenomena: Kooxaha kor u qaadista PCR-ku ma waafaqsana cabbirka la filayo, ha weynaado ama ha yaraado, ama mararka qaarkood labada qaybood ee xoojinta gaarka ah iyo guutooyinka xoojinta aan gaarka ahayn ayaa dhaca.
A-1 Horudhac
Specific Tilmaamid asaasi ah oo liidata
—— Dib-u-naqshadeynta asaasiga ah.
Concentration Feejignaanta asaasiga ahi aad bay u sarraysaa ——Si fiican u kordhi heerkulka denaturation -ka oo sii dheeree waqtiga dheellitirka.
A-2 Mg2+ foojignaan
M Mg2+ feejignaanta ayaa aad u sareysa ——Si fiican u yaree feejignaanta Mg2+: Hagaaji Mg2+ ku -uruurinta falcelinno taxane ah oo ka bilaabma 1 mM illaa 3 mM oo u dhexeysa 0.5 mM si loo go'aamiyo Mg -ga ugu habboon2+ xoojinta template kasta iyo hordhac.
A-3 Polymerase Thermostable
Amount Qaddarka enzme -ka xad -dhaafka ah——Soo yaree xaddiga enzyme si habboon oo u dhexeeya 0.5 U.
A-4 Heer kululaynta
Temperature Heerkulka ku-shubista ayaa aad u hooseeya ———In si habboon loo kordhiyo heerkulka daboolidda ama la qaato habka laba-wajiye
A-5 wareegyada PCR
Cy Wareegyo PCR aad u badan ——Soo yaree tirada wareegyada PCR.
A-1 Horudhac—— Tilmaamid liidata —— Dib-u-naqshadee horudhaca, beddel booska iyo dhererka astaanta si kor loogu qaado gaar ahaanshaheeda; ama samayso PCR buul ah.
A-2 Template DNA
—— Qaab -dhismeedka ma aha mid daahir ah ——Ku nadiifi template -ka ama ka soo saar DNA -da xirmooyinka is -daahirinta.
A-3 Mg2+ foojignaan
——Mg2+ feejignaanta ayaa aad u sareysa ——Si fiican u yaree Mg2+ feejignaanta: Hagaajinta Mg2+ ku -uruurinta falcelinno taxane ah oo ka bilaabma 1 mM illaa 3 mM oo u dhexeysa 0.5 mM si loo go'aamiyo Mg -ga ugu habboon2+ xoojinta template kasta iyo hordhac.
A-4 dNTP
—— Ku -uruurinta dNTP -yada aad ayay u sarraysaa ——Si habboon u yaree uruurinta dNTP
A-5 Heerkulbeeg
—— Heerkulka dabaysha oo aad u hooseeya ——- Si habboon u kordhi heerkulka dabaysha
A-6 Wareegyo
——Toolooyin badan ——Ku hagaaji lambarka wareegga
Tallaabada ugu horreysa waa inaad doorato polymerase habboon. Polymerase-ka caadiga ah ee Taq ma caddeyn karo sabab la xiriirta la'aanta waxqabadka 3'-5 ', iyo isku-dheelitir la'aantu waxay si weyn u yareyn doontaa wax-qabadka fidinta ee jajabyada. Sidaa darteed, polymerase -ka caadiga ah ee Taq si fiican uma kordhin karo jajabyada bartilmaameedka ee ka weyn 5 kb. Taq polymerase oo leh wax -ka -beddel gaar ah ama polymerase -ka kale ee aaminnimada sare leh waa in la xushaa si loo hagaajiyo hufnaanta fidinta oo loo daboolo baahiyaha ballaarinta jajabka dheer. Intaa waxaa dheer, xoojinta jajabyada dhaadheer sidoo kale waxay u baahan tahay hagaajin u dhiganta naqshadeynta asaasiga ah, waqtiga kala-soocidda, waqtiga kordhinta, pH-ka, iwm. Si looga hortago waxyeellada template, waqtiga denaturation -ka ee 94 ° C waa in lagu yareeyaa 30 seken ama ka yar wareeg kasta, iyo waqtiga heerkulka kor loogu qaadayo 94 ° C ka hor intaan la weyneyn waa inuu ka yaraadaa 1 min. Intaa waxaa dheer, dejinta heerkulka fidinta qiyaastii 68 ° C iyo naqshadeynta waqtiga kordhinta iyadoo la raacayo xaddiga 1 kb/min waxay xaqiijin kartaa xoojinta waxtarka leh ee jajabyada dhaadheer.
Heerka qaladka ee weyneynta PCR ayaa la dhimi karaa iyadoo la adeegsanayo polymerases DNA kala duwan oo leh aaminnimo sare. Waxaa ka mid ah dhammaan polymerase -ka Taq DNA ee la helay, Pfu enzyme wuxuu leeyahay heerka qaladka ugu hooseeya iyo daacadnimada ugu sareysa (eeg shaxda ku lifaaqan). Ka sokow xulashada enzyme, cilmi -baarayaashu waxay sii yareyn karaan heerka is -beddelka PCR iyagoo hagaajinaya xaaladaha falcelinta, oo ay ku jiraan hagaajinta halabuurka, xoojinta polymerase -ka heerkulka leh iyo hagaajinta lambarka wareegga PCR.
Qaybaha alaabta
MAXAA NAGU DOORTAY
Tan iyo markii la aasaasay, warshaddeennu waxay horumarinaysay alaabada heerka koowaad ee adduunka iyadoo la raacayo mabda'a
tayo leh marka hore. Alaabooyinkayagu waxay sumcad fiican ka heleen warshadaha iyo aaminaad qiimo leh oo ka dhexaysa macaamiisha cusub iyo kuwii horeba ..
- Tel: +86 010-59822688
- Dhismaha 5, No. 86, Shuangying West Road, Changping District, Beijing.
- people@tiangen.com
