2 Mix Isku -darka Pfu PCR

Daacadnimada aadka u sareysa ee Taq DNA polymerase.

Pfu DNA Polymerase waxaa laga muujiyaa E.coli oo leh Pyrococus Furiosis DNA Polymerase hiddo -wadaha oo la nadiifiyey oo lagu kala soocay nadiifinta tiirka oo badan. Sababtoo ah Pfu waxay leedahay 3′-5 activity waxqabad exonuclease ah, waxay dib u akhrin kartaa hannaanka xoojinta DNA, halka Taq DNA Polymerase dhaqameedku uusan awoodin. In kasta oo polymerases kale ee Taq DNA sida Vent, Deep Vent, Tli, UITma, iwm ay leeyihiin shaqooyin dib -u -hubin, Pfu waxay leedahay heerka ugu hooseeya ee isku -dheelitirnaan la'aanta dhammaan Taq DNA polymerases oo ilaa hadda la helay. Pfu DNA Polymerase waxay leedahay xasillooni kuleyl ka fiican Taq DNA polymerase, waxayna ku hayn kartaa in ka badan 90% dhaqdhaqaaqa 95 ° C muddo 1 saac ah.

Hal-tuubbo Pfu PCR Isku-darka (Shahaadada Wax-soosaarka Sare ee Qaranka)

Mix Isku -darka Pfu PCR wuxuu wanaajiyay gaar ahaanshaha iyo xasaasiyadda falcelinta PCR wuxuuna xoojin karaa qaab -dhismeedyada kakan oo leh GC sare, qaab -dhismeedka labaad iyo wixii la mid ah. Ilaa 2 nuqul oo ka mid ah template -ka la beegsanayo ayaa la kordhin karaa, iyadoo la hubinayo natiijooyin tijaabo oo sax ah.

Qaaciddada Pfu MasterMix ee gaarka ah ayaa ka dhigaysa nidaamka falcelinta oo dhan mid aad u xasilloon, hawshana ma saamayn doonto soo-dhalaalid soo noqnoqota ama kaydinta muddada-dheer 4 ° C.

Solution Xalka isku dhafan ee PCR ee xasilloon oo hufan oo hore loo diyaariyey ayaa qalliinka ka dhigi kara mid deg deg ah oo fudud, si weynna u yareynaya xoojinta shaqada iyo khalad sambal. Kor-u-qaade PCR-ga wax-qabadka sare leh iyo hagaajiye ayaa sidoo kale lagu daray isku-darka, kaasoo yareynaya shuruudaha xaaladaha PCR.

Product Badeecadani waxay leedahay nidaamyo dheeha ku jira iyo kuwo aan dheeh lahayn labadaba. Alaabta PCR Mix ee dheeha leh waxaa si toos ah loogu shidi karaa elektrophores ka dib PCR, iyada oo aan lagu darin keydinta saamiga.

Bisad. Maya Cabbirka xirxirida
4992780 1ml
4992781 5*1ml
4992782 1ml
4992906 5*1ml

Faahfaahinta Alaabta

Socodka shaqada

Su'aalaha badanaa la isweydiiyo

Calaamadaha alaabta

Qeexitaanka Waxqabadka

Waxqabadka 1 unug (U) Pfu DNA Polymerase waxaa lagu qeexaa xaddiga enzyme loo baahan yahay si loogu daro 10 nmol deoxynucleotides walxaha aashitada aan milmin ee 74 ° C 30 daqiiqo gudahood iyadoo la adeegsanayo shahwada salmon ee firfircoon sida DNA/template.

Xakamaynta Tayada

Daahirsanaanta ogaanshaha SDS-PAGE ayaa ka badan 99%; Wax dhaqdhaqaaq ah oo nuclease exogenous ah lama oga; Hiddo-hal-nuqul oo ku jira hidde-sidaha aadanaha ayaa si fiican loo kordhin karaa; Wax isbeddel ah oo firfircoon ma jiro marka lagu kaydiyo heerkulka qolka muddo hal toddobaad ah.

Halbeegyada Farsamo ee Ugu Weyn

Waxay leedahay 3′-5 activity waxqabad exonuclease oo aan lahayn 5′-3 activity waxqabad exonuclease ah. Xawaaraha fidinta ee xoojinta DNA-da ayaa ka hooseeya tan Tame polymerase, guud ahaanna xawaaraha fidinta ee enfu Pfu waa 0.5-1 kb daqiiqaddii. Degganaanshaha kuleylka ee Pfu wuxuu ka fiican yahay Taq. Istaraatiijiyadaha leh GC -ga sare, heerkulka diidmada ayaa loo kordhin karaa 98 ° C, taas oo aan wax saamayn ah ku yeelanayn waxqabadka Pfu polymerase. Badeecadda PCR-ku waa dhammaatay, taas oo lagu dari karo 3'-dA kor u qaadis ka hor inta aan lagu xidhin vector TA ama lagu xardhay vector dhammaaday

Codsiyada

Waxaa loo adeegsan karaa xoojinta aaminnimada sare ee DNA-da, sida hal-abuurka muujinta hidda-wadaha, isku-beddelka goobta lagu hago, falanqaynta hal nucleotide polymorphism (SNP) iyo dayactirka dhammaadka.

Dhammaan alaabooyinka waxaa loo habeyn karaa ODM/OEM. Faahfaahinta,fadlan guji Adeegga La -habeeyey (ODM/OEM)


  • Hore:
  • Xiga:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental ExampleExperimental Example U adeegso DNA -ga hidde -sidaha qaab -dhismeed si aad u ballaariso jajab 1kb.
    Kadib falcelinta PCR, qaado 5 μl si loo ogaado electrophoresis.
    S: Ma jiraan kooxo cod -weyne

    A-1 Template

    Template Qaab -dhismeedka waxaa ku jira wasakhda borotiinka ama ka -hortagayaasha Taq, iwm .——- Daahiri template DNA, ka saar wasakhda borotiinka ama soo saar DNA -da template oo leh xirmooyin nadiifin ah.

    Diidmada qaab -dhismeedku ma dhammaystirna ——-In si habboon loo kordhiyo heerkulka denaturation -ka oo la dheereeyo waqtiga wax -soo -saaridda.

    Deg Hoosudhaca Template ——Dib u diyaari template-ka.

    A-2 Primer

    Quality Tayada liidata ee raasamayaasha ——Dib-isugu-dar-darreeyaha.

    Rad Hoos -u -dhac horudhac ah ——Waxaad u dhigtaa aasaaska fiirsashada sare mugga yar si loo ilaaliyo. Ka fogow baraf badan iyo dhalaalid ama 4 ° C cryopreserved.

    Design Naqshadeynta aan fiicnayn ee raasamaalka (tusaale.

    A-3 Mg2+foojignaan

    ■ Mg2+ feejignaanta ayaa aad u yar ——Si fiican u kordhi Mg2+ feejignaanta: Hagaajinta Mg2+ ku -uruurinta falcelinno taxane ah oo ka bilaabma 1 mM illaa 3 mM oo u dhexeysa 0.5 mM si loo go'aamiyo Mg -ga ugu habboon2+ xoojinta template kasta iyo hordhac.

    A-4 Heer kululaynta

    Temperature Heerkulka ku -shubista oo sarreeya wuxuu saameeyaa ku -xidhmidda aasaaska iyo tusaalaha. ——Soo yaree heerkulka sifeynta oo aad ku wanaajiso xaaladda iyadoo leh weji 2 ° C ah.

    A-5 Waqtiga Kordhinta

    Time Wakhti kordhinta oo gaaban —— Kordhi wakhtiga kordhinta.

    S: Been abuur

    Phenomena: Shaybaarada taban ayaa sidoo kale muujinaya kooxaha taxanaha bartilmaameedka ah.

    A-1 Faddaraynta PCR

    Ka gudubta isku xigxiga bartilmaameedka ama alaab -weyneynta ——- Si taxaddar leh ha ugu shubin saambalka ay ku jiraan isku xigxiga bartilmaameedka muunadda taban ama ka daadi tuubada centrifuge -ga. Soo -saareyaasha ama qalabka waa in si otomaatig ah loo xiro si loo baabi'iyo asiidhka nucleic ee jira, iyo jiritaanka faddaraynta waa in lagu go'aamiyaa tijaabooyinka xakamaynta xun.

    Contamin Faddaraynta reagent ——Soo celi reagentyada oo ku kaydi heerkul hoose.

    A-2 Ra'iisulr

    ■ Mg2+ feejignaanta ayaa aad u yar ——Si fiican u kordhi Mg2+ feejignaanta: Hagaajinta Mg2+ ku -uruurinta falcelinno taxane ah oo ka bilaabma 1 mM illaa 3 mM oo u dhexeysa 0.5 mM si loo go'aamiyo Mg -ga ugu habboon2+ xoojinta template kasta iyo hordhac.

    Design Naqshadaynta asaasiga ah ee aan habboonayn, iyo taxanaha bartilmaameedka ayaa leh isbarbardhig leh isku xigxiga aan bartilmaameedka ahayn. —— Dib-u-naqshadeeyayaasha naqshadeynta.

    S: Ballaarinta aan gaarka ahayn

    Phenomena: Kooxaha kor u qaadista PCR-ku ma waafaqsana cabbirka la filayo, ha weynaado ama ha yaraado, ama mararka qaarkood labada qaybood ee xoojinta gaarka ah iyo guutooyinka xoojinta aan gaarka ahayn ayaa dhaca.

    A-1 Horudhac

    Specific Tilmaamid asaasi ah oo liidata

    —— Dib-u-naqshadeynta asaasiga ah.

    Concentration Feejignaanta asaasiga ahi aad bay u sarraysaa ——Si fiican u kordhi heerkulka denaturation -ka oo sii dheeree waqtiga dheellitirka.

    A-2 Mg2+ foojignaan

    M Mg2+ feejignaanta ayaa aad u sareysa ——Si fiican u yaree feejignaanta Mg2+: Hagaaji Mg2+ ku -uruurinta falcelinno taxane ah oo ka bilaabma 1 mM illaa 3 mM oo u dhexeysa 0.5 mM si loo go'aamiyo Mg -ga ugu habboon2+ xoojinta template kasta iyo hordhac.

    A-3 Polymerase Thermostable

    Amount Qaddarka enzme -ka xad -dhaafka ah——Soo yaree xaddiga enzyme si habboon oo u dhexeeya 0.5 U.

    A-4 Heer kululaynta

    Temperature Heerkulka ku-shubista ayaa aad u hooseeya ———In si habboon loo kordhiyo heerkulka daboolidda ama la qaato habka laba-wajiye

    A-5 wareegyada PCR

    Cy Wareegyo PCR aad u badan ——Soo yaree tirada wareegyada PCR.

    S: Kooxaha dhejiska ah ama la mariyo

    A-1 Horudhac—— Tilmaamid liidata —— Dib-u-naqshadee horudhaca, beddel booska iyo dhererka astaanta si kor loogu qaado gaar ahaanshaheeda; ama samayso PCR buul ah.

    A-2 Template DNA

    —— Qaab -dhismeedka ma aha mid daahir ah ——Ku nadiifi template -ka ama ka soo saar DNA -da xirmooyinka is -daahirinta.

    A-3 Mg2+ foojignaan

    ——Mg2+ feejignaanta ayaa aad u sareysa ——Si fiican u yaree Mg2+ feejignaanta: Hagaajinta Mg2+ ku -uruurinta falcelinno taxane ah oo ka bilaabma 1 mM illaa 3 mM oo u dhexeysa 0.5 mM si loo go'aamiyo Mg -ga ugu habboon2+ xoojinta template kasta iyo hordhac.

    A-4 dNTP

    —— Ku -uruurinta dNTP -yada aad ayay u sarraysaa ——Si habboon u yaree uruurinta dNTP

    A-5 Heerkulbeeg

    —— Heerkulka dabaysha oo aad u hooseeya ——- Si habboon u kordhi heerkulka dabaysha

    A-6 Wareegyo

    ——Toolooyin badan ——Ku hagaaji lambarka wareegga

    S: Intee in le'eg ayaa DNA -ga lagu darayaa nidaamka falcelinta PCR ee 50 μl?
    ytry
    S: Sidee loo kordhiyaa jajabyada dhaadheer?

    Tallaabada ugu horreysa waa inaad doorato polymerase habboon. Polymerase-ka caadiga ah ee Taq ma caddeyn karo sabab la xiriirta la'aanta waxqabadka 3'-5 ', iyo isku-dheelitir la'aantu waxay si weyn u yareyn doontaa wax-qabadka fidinta ee jajabyada. Sidaa darteed, polymerase -ka caadiga ah ee Taq si fiican uma kordhin karo jajabyada bartilmaameedka ee ka weyn 5 kb. Taq polymerase oo leh wax -ka -beddel gaar ah ama polymerase -ka kale ee aaminnimada sare leh waa in la xushaa si loo hagaajiyo hufnaanta fidinta oo loo daboolo baahiyaha ballaarinta jajabka dheer. Intaa waxaa dheer, xoojinta jajabyada dhaadheer sidoo kale waxay u baahan tahay hagaajin u dhiganta naqshadeynta asaasiga ah, waqtiga kala-soocidda, waqtiga kordhinta, pH-ka, iwm. Si looga hortago waxyeellada template, waqtiga denaturation -ka ee 94 ° C waa in lagu yareeyaa 30 seken ama ka yar wareeg kasta, iyo waqtiga heerkulka kor loogu qaadayo 94 ° C ka hor intaan la weyneyn waa inuu ka yaraadaa 1 min. Intaa waxaa dheer, dejinta heerkulka fidinta qiyaastii 68 ° C iyo naqshadeynta waqtiga kordhinta iyadoo la raacayo xaddiga 1 kb/min waxay xaqiijin kartaa xoojinta waxtarka leh ee jajabyada dhaadheer.

    S: Sidee loo hagaajiyaa daacadnimada xoojinta PCR?

    Heerka qaladka ee weyneynta PCR ayaa la dhimi karaa iyadoo la adeegsanayo polymerases DNA kala duwan oo leh aaminnimo sare. Waxaa ka mid ah dhammaan polymerase -ka Taq DNA ee la helay, Pfu enzyme wuxuu leeyahay heerka qaladka ugu hooseeya iyo daacadnimada ugu sareysa (eeg shaxda ku lifaaqan). Ka sokow xulashada enzyme, cilmi -baarayaashu waxay sii yareyn karaan heerka is -beddelka PCR iyagoo hagaajinaya xaaladaha falcelinta, oo ay ku jiraan hagaajinta halabuurka, xoojinta polymerase -ka heerkulka leh iyo hagaajinta lambarka wareegga PCR.

    Halkan ku qor fariintaada oo noo soo dir