TGuide S96 Xidhmada/Unugga/Cadka RNA

A-1 Lysis cell ama homogenization kuma filna

---- Yaree isticmaalka muunadda, kordhi xaddiga kaydinta lysis, kordhiso isugeynta iyo waqtiga lysis.

A-2 Tirada muunaddu aad bay u badan tahay

---- Yaree cadadka muunada la isticmaalay ama la kordhiyo tirada kaydinta lysis.

A-1 Lysis unug oo aan ku filnayn ama isugeyn

---- Yaree isticmaalka muunadda, kordhi xaddiga kaydinta lysis, kordhiso isugeynta iyo waqtiga lysis.

A-2 Tirada muunaddu aad bay u badan tahay

---- Fadlan tixraac awoodda wax-qabadka ugu badan.

A-3 RNA gebi ahaanba lagama soo qaadin tiirka

---- Kadib markaad ku darto biyaha RNase-Free, ka tag dhowr daqiiqo ka hor intaadan ku shubin.

A-4 Ethanol ee ugu sarreeya

---- Ka dib markii aad biyo raacisay, mar kale centrifuge ka saar bakhaarka dhaqidda intii suurtogal ah.

A-5 Dhaqanka dhexdhexaadka ah gebi ahaanba lagama saaro

---- Markaad uruurinayso unugyo, fadlan hubso inaad ka saarto dhexdhexaadinta dhaqanka intii suurtogal ah.

A-6 Unugyada lagu kaydiyo RNAstore si fiican looma darin

---- Cufnaanta RNAstore-ku waxay ka weyn tahay celceliska dhaqanka unugyada; sidaas darteed waa in la kordhiyaa ciidanka dhexe. Waxaa lagu talinayaa in centrifuge at 3000x g.

A-7 Wax yar oo RNA ka kooban iyo tiro badan oo muunadda ah

---- Isticmaal muunad togan si aad u go'aamiso in dhalidda hooseysa ay keentay sambalku.

A-1 Maaddadu ma aha mid cusub

---- Unugyada cusub waa in lagu kaydiyo nitrogen dareere ah isla markiiba ama isla markiiba lagu rido reagent RNAstore si loo hubiyo saamaynta soo saaridda.

A-2 Tirada muunaddu aad bay u badan tahay

---- Yaree cadadka saamiga.

A-3 RNase wasakhaysann

---- Inkastoo kaydka ku jira xirmada uusan ku jirin RNase, way fududahay in la sumoobo RNase inta lagu jiro habka soo saaridda waana in si taxaddar leh loo maareeyaa.

A-4 Nadiifinta Electrophoresis

---- Beddel keydka korontada oo hubso in alaabta wax-cunaysa iyo Kaydinta Loading ay ka madax bannaan yihiin faddaraynta RNase.

A-5 Rarid aad u badan oo loogu talagalay electrophoresis

---- Hoos u dhig xaddiga rarista muunadda, ceel kasta rarantiisu waa inaysan dhaafin 2 μg.

A-1 Tirada muunaddu aad bay u badan tahay

---- Yaree cadadka saamiga.

B

-U samee daaweynta DNase-ka-dhaafka ah ee DNase xalka RNA ee la helay, RNA-na waxaa si toos ah loogu adeegsan karaa tijaabooyinka xiga daaweynta kadib, ama waxaa lagu sii nadiifin karaa xirmooyinka is-nadiifinta RNA.

Muraayadaha dhalooyinka, waxaa lagu dubay 150 ° C 4 h. Weelasha balaastigga ah, oo lagu dhex milay 0.5 M NaOH muddo 10 daqiiqo ah, ka dibna si fiican loogu maydhay biyo aan RNase lahayn ka dibna jeermis si looga saaro RNase. Soo -saarayaasha ama xalka loo adeegsaday tijaabada, gaar ahaan biyaha, waa inay ka madax bannaan yihiin RNase. U isticmaal biyo aan RNase lahayn dhammaan diyaarinta reagent (ku dar biyo dhalo galaas nadiif ah, ku dar DEPC xaddiga ugu dambeeya ee 0.1% (V/V), rux habeen iyo autoclave).